青旗與您分享人elisa試劑盒的操作方法

　　人elisa試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認(rèn)可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內(nèi)生化領(lǐng)域的長足發(fā)展。elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。人elisa試劑盒適用于體外定性檢測人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎（HEV）病毒 IgM 抗體ELISA檢測。

 

　　人elisa試劑盒的操作方法：

　　雙抗體夾心法：

　　1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。

　　2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。

　　3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

　　4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

　　5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

　　間接法：

　　1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

　　2、次日洗滌3次；

　　3、加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時，洗滌；

　　4、于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；

　　5、37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

　　6、最后一遍用DDW洗滌。

　　其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。