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分享使用人elisa試劑盒的詳細(xì)步驟

發(fā)布時間: 2023-04-18  點擊次數(shù): 1896次
  ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)是一種廣泛用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷的技術(shù)。人elisa試劑盒是一套預(yù)先包裝好的組件,用于檢測特定蛋白質(zhì)或其他分子在樣本中的存在量。下面是使用人elisa試劑盒的詳細(xì)步驟:
 

 

  步驟1:收集樣本
  首先需要收集待測試的樣本。這可以是血液、尿液、唾液等生物樣本。將樣本放入試管中,并將其標(biāo)記以避免與其他樣本混淆。
 
  步驟2:稀釋樣本
  對于某些樣本,如血清和血漿,需要進行稀釋。這是為了確保樣本中含有足夠低的蛋白質(zhì)濃度,以避免在后續(xù)步驟中出現(xiàn)假陽性結(jié)果。通常會用緩沖液稀釋樣品,使得樣品能夠被人elisa試劑盒所檢測。
 
  步驟3:裝載試板
  將96孔板插入孔板支架中,并將每個孔加入要測試的樣本或標(biāo)準(zhǔn)品。每個孔位都需要添加適量的綁定抗體,并進行孵育反應(yīng)。
 
  步驟4:孵育
  將孔板放入溫度控制器中,一般會將其孵育30-60分鐘,以便樣本中的蛋白質(zhì)與綁定抗體結(jié)合。在此過程中,可以通過輕輕震動微板使物質(zhì)更充分地混合。
 
  步驟5:洗滌
  使用緩沖液或PBS洗滌孔板,去除不結(jié)合的物質(zhì)。通常需要洗滌2-5次,以確保所有不結(jié)合的物質(zhì)都已被清除。
 
  步驟6:加入檢測抗體
  將檢測抗體添加到每個孔位中,并進行孵育反應(yīng)。此抗體將與之前的綁定抗體結(jié)合,并形成一個復(fù)合物。這個復(fù)合物是將要檢測的蛋白質(zhì)、抗原或其他生物分子的檢測目標(biāo)。
 
  步驟7:再次洗滌
  使用緩沖液或PBS洗滌孔板,去除不結(jié)合的物質(zhì)。
 
  步驟8:加入底物
  將底物HRP(過氧化物酶)添加到每個孔位中,并進行孵育反應(yīng)。復(fù)合物將與底物發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化的信號。
 
  步驟9:終止反應(yīng)
  在可見的顏色出現(xiàn)之前,及時添加停止反應(yīng)的緩沖液。這會阻止進一步產(chǎn)生顏色,并穩(wěn)定復(fù)合物的信號。
 
  步驟10:測量信號
  使用讀數(shù)器或多光譜分析儀測量每個孔位的吸光度。吸光度與蛋白質(zhì)、抗原或其他生物分子的存在量成正比。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中蛋白質(zhì)的含量。
 
  人elisa試劑盒是一種用于檢測特定生物分子的快速、靈敏和可靠的方法。通過遵循以上步驟,可以使用人elisa試劑盒進行高質(zhì)量的實驗并得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

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