JM330化學感受態(tài)細胞

JM330化學感受態(tài)細胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86030-01(10×100ul)/BFNC86030-02(50×100ul)

JM330：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F- φ80 lacZ?M15 ?(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA

產(chǎn)品說明

JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant)，來源于DH5α菌株。在DH5α大腸桿菌基因組中引入tonA，賦予其抗噬菌體T1,T5的能力，即為JM330。JM330菌株的特點是其可以在體內特異性降解甲基化質粒模板，廣泛應用于各種DNA定點突變試驗中。JM330菌株缺失核酸內切酶 (endA1)和重組酶(recA1)，提高了質粒DNA的產(chǎn)量和質量； lacZΔM15的存在使JM330可用于藍、白斑篩選。

青旗生物開發(fā)的JM330感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>1×10⁹ cfu/μg DNA。

JM330化學感受態(tài)細胞

操作方法

1. JM330感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（例如：Dpn I消化產(chǎn)物等）并用手bo打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取50 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱至少15小時。

注意事項

1. 感受態(tài)細胞適宜在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. JM330可以對未被Dpn I降 解掉的質粒模板進行進一步的降解，因此可以保證定點突變具有更高的陽性率。

3. 轉化高濃度的質粒或Dpn I消化產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。