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克隆感受態細胞

克隆感受態細胞

簡要描述:青旗生物提供一百余種基因型不同的克隆感受態細胞,滿足您的各種分子生物學實驗需求,如:普通質粒構建、藍白斑篩選、大質粒構建、易重組質粒構建、慢病毒和腺病毒載體構建、甲基化DNA克隆、高質量質粒提取、文庫構建等。
同時我們還提供多種電擊感受態細胞,為大質粒構建、高效率轉化和文庫構建提供方便。

更新時間:2021-07-20

廠商性質:生產廠家

瀏覽次數:3814

詳情介紹
品牌其他品牌供貨周期現貨
主要用途僅用于科研應用領域醫療衛生,生物產業

一、克隆感受態細胞基因型

F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1 phoA

二、產品說明

DH5α菌株是實驗室常用的感受態細胞。 缺失核酸內切酶 (endA),提高了質粒DNA的產量和質量;重組酶缺陷型 (recA)減少插入片段的同源重組概率,保證了插入DNA 的穩定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于藍、白斑篩選。DH5α感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108 cfu/μg DNA。

三、克隆感受態細胞操作方法

1. DH5α感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少15小時。

四、注意事項

1. 感受態細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。







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