T0PI0化學感受態細胞

T0PI0化學感受態細胞

產品規格CAT#: BFNC86003-01(20×100ul)/BFNC86003-02(100×100ul)

T0PI0：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期)：                            -80℃（6個月）

基因型

F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (Str^R) endA1 nupG

產品說明

T0PI0菌株來源于MC1061菌株，是目前實驗室常用的感受態細胞之一，基因型與DH10B高度類似 (DH10B為galE15型，而T0PI0為galU型)。T0PI0生長速度快 (比DH5α快，但比Mach1-T1生長速度慢)，10小時可見克隆，recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。可用于構建克隆，藍白斑篩選等實驗。

青旗生物生產的T0PI0感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>5×10⁸cfu/μg DNA。

T0PI0化學感受態細胞

操作方法

1. T0PI0感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質粒或連接產物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養至少13 h。

注意事項

1. 感受態細胞宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少終用于涂板的菌量。